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超净工作台在细胞培养实验中的应用


植物(plant)组织具有无限增殖和产生不定芽、不定根的能力。净化工作台的原理:洁净环境是在特定的空间内,洁净空气(进滤空气)按设定的方向流动而形成的。以气流方向来分,现有的超净工作台可分为垂直式,由内向外式以及侧向式。在培养条件(tiáo jiàn)适宜时,只要通过一个超净工作台,以及用一个芽可以培养出许多植株来。其在保持优良砧木及品种种性、进行工厂化育苗方面具有很好的意义。
 
超净工作台在细胞培养实验中的应用方法步骤(procedure)如下:
 
   
  一、外植体接种与材料(Material)消毒(disinfection)
   取田间当年生新梢或一年生枝蔓,去叶,用肥皂水将表面(appearance)刷洗,并用自来水冲洗干净,剪成一芽一段,放入干净烧杯,拿进超净工作(gōng zuò)台;先用70%酒精过一下,无菌(fungus)水(用高压锅,在120℃下,灭菌30分钟的水)冲洗3遍;再用0.1%升汞液消毒(disinfection)5~10分钟,无菌水冲洗3遍;然后用酒精灯(Alcohol lamp)火焰消毒过的工具(镊子、剪刀、拨针、剖解刀等)剥去鳞片、叶柄,取出带数个叶原基的幼芽接入培养基,半包埋。
 
   培养基配好后装入广口的罐头瓶、三角瓶或试管,装入量为1~2厘米高。净化工作台用途:广泛适用于医药卫生、生物制药、食品、医学科学实验、光学、电子、无菌室实验、无菌微生物检验、植物组培接种等需要局部洁净无菌工作环境的科研和生产部门。也可连接成装配生产线具有低噪声、可移动性等优点。120℃灭菌(Sterilization)(fungus)30分钟后备用。
 
   外植体接种后放到培养室的培养架上培养。培养条件(tiáo jiàn)为:光照1000勒克斯,8~10个小时,暗14~16小时;温度(temperature)25~28℃。培养1~2周,即可看出是否消毒(disinfection)彻底,有无感染。及时巡查,将未感染的外植体转接到新的培养瓶内,丢弃已感染的外植体。
 
   
  二、继代繁殖
   上述接入的外植体培养1~2个月,即可长到2~3厘米长。在超净工作(gōng zuò)台上,将其剪成约1厘米长茎段,接种到新的培养基中(培养基的配方同上)。剪茎段时所用工具和培养皿(或牛皮纸)都要经过消毒,消毒方法分别同上述酒精(术语称乙醇)灯消毒法和高压消毒法。
 
   其后,大约每25天左右进行一次继代培养。每次的茎段增殖量约为3~4倍。反复进行,直到所需数量。
 
   
  三、生根
   上述培养的茎段长到2厘米以上时,即可用于生根。生根培养基的成分为上述培养基的大量元素减半,除激素和蔗糖外,其他成分不变。
 
   生根培养基配好后也需高压灭菌(120℃,30分钟)后使用。
 
   生根培养20天左右,茎段上即可长出根,成为完整苗。生根苗长到3~5厘米长时即可锻炼、移栽。
 
   
  四、生根苗的锻炼、移栽
   (一)锻炼
 
   组培苗在人工培养条件(tiáo jiàn)下长期生长,对自然生长环境(environment)的适应性减弱。超净工作台是为了适应现代化工业、光电产业、生物制药以及科研试验等**域对局部工作区域洁净度的需求而设计的。移栽前需要一个过渡阶段,即锻炼。锻炼方法(method)为:将培养瓶移**自然光照下2~3天,打开瓶口2~3天,再移栽。
 
   (二)移栽
 
   移栽时先洗净根上培养基,避免(avoid)培养基感染杂菌(fungus)致苗死亡。移栽方法及灌水、遮阳等管理同实生苗移栽。但注意(attention)组培苗比较娇嫩,需轻盈操作。
 
   
  五、工厂化育苗
 
将上述培养基制备及超净工作台相关(related)、装瓶、消毒(disinfection)、无菌(fungus)苗增殖、生根、锻炼、移栽等过程全部放在实验(experiment)室和温室中进行,即为工厂化育苗。目前,这样的生产线已在意大利和法**投入使用。但外植体接种尚需人工操作。

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