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无菌操作原则先容(2)

3 .将培养容器斜面向上,并使它们拉于水平位置,也可将培养容器放在左手中。将塞盖用右手拧转松动,以便接种时拔出。用火焰灼烧管口,灼烧时应不断转动试管口(靠手腕的动作,使试管口沾染的少量菌得以烧死)。将烧过的接种针(环)触动培养基部分,使其冷却,以免烧死被接种的外植体,然后轻轻接触外植体,慢慢将接种针(环)抽出试管,打开培养容器盖,将外植体放在培养基上,每瓶放3 块。封口,贴标签,注明姓名,标明时间和材料名称。整理好接种室(箱)的台面,搞好清洁卫生。 
4 .用水洗干净非洲澎蜞菊叶片,用滤纸擦干后置于100 mL 烧杯中,在超净工作台上加入75%乙醇溶液浸泡30s,然后用0.1%氯化汞溶液浸泡3 、5 、7 min,用无菌水洗涤3 次,将叶片切成长1cm ,按照上述同样的步骤接种于培养基上。 
5 .绿豆种子用75%乙醇溶液浸泡30 s,然后用0.1%氯化汞溶液(加入吐温2 滴)浸泡3 、5 、10 min ,期间不断搅拌溶液,用无菌水洗涤5~6 遍,洗干种子外围水分,按照上述同样的步骤接种于培养基上。  
无菌操作原则: 
  一、在实行无菌操作时,**明确物品的无菌区和非无菌区。 
  二、实行无菌操作前,先戴帽子、口罩、洗手,并将手擦干,注意空气和环境清洁。   三、夹取无菌物品,**使用无菌持物钳。    [无菌操作间]  
无菌操作间 
四、进行无菌操作时,凡未经消毒的手、臂、均不可直接接触无菌物品或超过无菌区取物。   五、无菌物品**保存在无菌包或灭菌容器内,不可暴露在空气中过久。无菌物与非无菌物应分别放置。无菌包一经打开即不能视为**无菌,应尽早使用。凡已取出的无菌物品虽未使用也不可再放回无菌容器内。 
  六、无菌包应按消毒日期顺序放置在固定的柜橱内,并保持清洁干燥,与非灭菌包分开放置,并经常检查无菌包或容器是否过期,其中用物是否适量。 
  七、无菌盐水及酒精、新洁尔灭棉球罐每周消毒一次,容器内敷料如干棉球、纱布块等,不可装得过满,以免取用时碰在容器外面被污染。  
原则及注意事项 
无菌操作原则: 
  一、在实行无菌操作时,**明确物品的无菌区和非无菌区。   二、实行无菌操作前,先戴帽子、口罩、洗手,并将手擦干,注意空气和环境清洁。   三、夹取无菌物品**使用无菌持物钳。  
  
 
无菌操作间 
四、进行无菌操作时,凡未经消毒的手、臂、均不可直接接触无菌物品或超过无菌区取物。   五、无菌物品**保存在无菌包或灭菌容器内,不可暴露在空气中过久。无菌物与非无菌物应分别放置。无菌包一经打开即不能视为**无菌,应尽早使用。凡已取出的无菌物品虽未使用也不可再放回无菌容器内。   六、无菌包应按消毒日期顺序放置在固定的柜橱内,并保持清洁干燥,与非灭菌包分开放置,并经常检查无菌包或容器是否过期,其中用物是否适量。   七、无菌盐水及酒精、新洁尔灭棉球罐每周消毒一次,容器内敷料如干棉球、纱布块等,不可装得过满,以免取用时碰在容器外面被污染。  
无菌操作技术及注意事项 
1、玻璃器皿的消毒和清洁   ⑴新购玻璃器皿的处理新购玻璃器皿应用热肥皂水洗刷,流水冲洗,再用1%~2%盐酸溶液浸泡,以除去游离碱,再用水冲洗。对容量较大的器皿如试剂瓶、烧瓶或量具等,经清水洗净后应注入浓盐酸少许,慢慢转动,使盐酸布满容器内壁数分钟后倾出盐酸,再用水冲洗。   ⑵污染玻璃器皿的处理   ①一般试管或容器可用3%煤酚皂溶液或5%石炭酸浸泡,再煮沸30分钟,或在3%~5%漂白粉澄清液内4小时,有的亦可用肥皂或合成洗涤剂洗刷使尽量产生泡沫,然后用清水冲洗**无肥皂为止。**后用少量蒸馏水冲洗。   ②细菌培养用的试管和培养皿可先行集中,用1kg/cm2高压灭菌15~30分钟,再用热水洗涤后,用肥皂洗刷,流水冲洗。   ③吸管使用后应集中于3%煤酚皂溶液中浸泡24小时,逐支用流水反复冲洗,再用蒸馏水冲洗。   ④油蜡沾污的器皿,应单独灭菌洗涤,先将沾有油污的物质弃去,倒置于吸水纸上,100℃烘干半小时,再用碱水煮沸,肥皂洗涤,流水冲洗。必要时可用二甲苯或汽油去油污。   ⑤染料沾污的器皿,可先用水冲洗,后用清洁或稀盐酸洗脱染料,再用清水冲洗。一般染色剂呈碱性,所以不宜用肥皂的碱水洗涤。   ⑥玻片可置于3%煤酚皂溶液中浸泡,取出后流水冲洗,再用肥皂或弱碱性煮沸,自然冷却后,流水冲洗。被结核杆菌污染或不易洗净的玻片,可置于清洁液内浸泡后再冲洗。   2、无菌器材和液体的准备将玻璃器具中的培养皿、培养瓶、试管、吸管等按上述方法洗净烘干后,用一洁净纸包好瓶口并把吸管尾端塞上棉花,装入干净的铝盒或铁盒中,于120℃的干燥箱中干燥灭菌2小时,取出备用。对于手术器械、瓶塞、工作服以及新配制的PBS洗液,则采用高压蒸气灭菌法,即在15磅的条件下,加热20分钟。而对于MEM培养液、小牛血清和消化液等需用G5或G6滤器负压抽滤后使用。   3、无菌操作过程在无菌操作过程中,**重要的是要保持工作区的无菌、清洁。因此,在操作前20~30分钟要先启动超净台和紫外灯,并认真洗手和消毒。在操作时,严禁喧哗,严禁用手直接拿无菌物品,如瓶塞等,而**用消毒的止血钳、镊子等。培养瓶应在超净台内操作,并且在开启和加盖瓶塞时需反复用酒精灯烧。对于吸管应先用手拿后1/3处,戴上胶皮乳头,并用酒精灯烧烤之后再吸液体。   4、常用清洁液的配制法⑴重铬酸钾清洁液:可根据不同需要,选用下列的任何一种浓度。先将重铬酸钾溶于水中,再慢慢加入浓硫酸。注意,此

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